在國標GB5009.22—2016方法1：同位素稀釋液相色譜-串聯質譜法的酿酒基礎上進行了方法優化、改進，原料建立了釀酒原料及白酒中黃曲黴毒素B1（AFTB1）的及白酒中进分析方法。樣品經甲醇∶水（7∶3）提取後，黄曲淨化稀釋液由TritionX-100的霉毒PBS改為超純水，黏度變小、测定方易於通過萃取小柱。法改流動相改為甲醇和0.02%甲酸-2mmol／L乙酸銨，酿酒提高了響應強度。原料梯度洗脫，及白酒中进經高效液相色譜分離，黄曲在ESI正離子模式下掃描，霉毒進行多反應監測模式（MRM）檢測。测定方

結果表明，法改儀器精密度良好，酿酒不同濃度標液相對標準誤差（RSD%）均<6%；所繪製校準曲線線性關係良好，0.05～10µg／L範圍內相關係數r值>0.999；方法定量限為0.05µg／kg，檢出限<0.01μg／kg，均低於其他檢測方法。原料與白酒的加標回收率都在90%～105%，完全符合要求。此方法檢出限低、準確度高，加強了企業對AFTB1的嚴格監控。

白酒釀造原料主要有高粱、大麥、小麥、豌豆等，因釀酒原料用量較大，酒廠一般對原料批量購買，進行存儲使用，一旦購買原料存在安全隱患或存儲不當造成黴變，將產生一些對人體有害的黴菌毒素類物質，其中黃曲黴毒素B1（AFTB1）對人體健康的危害最大，為強毒性、強致癌性物質，已被世界衛生組織癌症機構（IARC）列入一級致癌物。

為了嚴格控製黃曲黴毒素對人體的危害風險，從而保障消費者的安全，美國、日本、加拿大等多個國家已發布了有關黃曲黴毒素最大限定量的規定，我國GB2761—2017《食品安全國家標準食品中真菌毒素限量》標準中也規定了糧食中的真菌毒素B1的最大限量，鳳香型釀酒原料（高粱、大麥、小麥、豌豆）中的最大限量分別為10µg／kg、5µg／kg、5µg／kg、5µg／kg。盡管如此，但仍然存在一定的風險，因此建立準確、高效的檢測方法尤為重要。

目前對於黃曲黴毒素的檢測方法主要有液相色譜-熒光檢測法、酶聯免疫吸附篩查法、高光譜檢測法、薄層色譜法、同位素稀釋液質聯用法等。本研究建立了釀酒原料及白酒中AFTB1的液質聯用（HPLC-MS／MS）檢測法。該方法樣品前處理較簡單、檢測效率高、準確度高、檢測限更低，進一步滿足了消費者對食品安全更高的期望和國家對食品檢測更嚴的要求。

1材料與方法

1.1材料、試劑與儀器

樣品：原料（高粱、大麥、小麥），成品酒取自於陝西西鳳酒股份有限公司。

試劑：甲酸、乙腈、甲醇、乙酸銨（分析純）、超純水。

儀器設備：高效液相色譜串聯質譜儀，萬分天平，氮吹儀，免疫親和柱。

標準品：黃曲黴毒素B1（AFTB1純度≥98%），同位素內標13C17-AFTB1（純度≥98%）。

1.2標準溶液的配製

AFTB1標準儲備液：稱取AFTB1為1.0mg，用乙腈定容至100mL容量瓶，配製成10µg／mL標準儲備液。

同位素內標13C17-AFTB1工作液：準確移取0.5µg／mL的13C17-AFTB10.8mL，用乙腈定容至10mL，配製成40ng／mL的同位素內標工作液。

AFTB1係列標準工作液：移取AFTB1標準儲備液1.0mL至100mL容量瓶中，用乙腈定容，配製成100ng／mL的AFTB1中間標準液。再分別移取AFTB1中間標準液5µL、10µL、50µL、100µL、200µL、500µL、800µL、1000µL至10mL容量瓶中，分別加500µL的40ng／mL同位素內標工作液，用初始流動相定容，配製成濃度為0.05ng／mL、0.1ng／mL、0.5ng／mL、1.0ng／mL、2.0ng／mL、5.0ng／mL、8.0ng／mL、10.0ng／mL的係列標準工作液，過0.22µm濾膜，待上機。

1.3儀器參數條件

液相條件：色譜柱：Shin-packXR-ODSIIIC18（2.0mmI.D*150mmL.，3.0μm）；進樣量：10µL；流動相：A：0.02%甲酸-2mmol／L乙酸銨，B：甲醇；柱溫：40℃；流速：0.3mL／min；駐留時間：10ms。洗脫方式：梯度洗脫，見表1。

質譜條件：掃描方式：多級反應監測（MRM）；離子源：ESI，正離子模式；加熱塊溫度：450℃；DL溫度：250℃；霧化氣流速：3.0L／min；幹燥氣流速：15L／min；離子源接口電壓+4.5；駐留時間：10ms。

1.4試驗方法

1.4.1樣品提取

釀酒原料：準確稱取釀酒原料5g樣品於50mL離心管中，加入250µL同位素內標工作液，旋渦振蕩混勻，加入20mL甲醇-水（70+30），渦旋混勻，靜置30min後用均質器均質3min，過玻璃纖維濾紙。準確移取濾液4mL加入12mL的超純水，混合均勻，待淨化。

酒樣：稱取2g酒樣，加入100µL同位素內標工作液，加入4mL水，振蕩混勻，待淨化。

1.4.2淨化

原料：待免疫親和柱保護液流盡後加入上述溶液，以1滴／s的流速通過免疫親和柱，流完後用2×10mL超純水淋洗免疫親和柱，自然重力流幹後擠幹小柱，準確加入2×0.5mL甲醇洗脫，再加1mL水擠幹，收集於比色試管中，過0.22µm有機濾膜，待上機。

酒樣：待免疫親和柱保護液流盡後加入1.4.1中酒樣溶液，自然重力下滴，流完後加10mL去離子水淋洗柱子，擠幹；加2×0.5mL甲醇洗脫，再加1mL水擠幹，收集於比色試管中，過0.22µm有機濾膜，待上機。

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