1、高效水：水是液相反相高效液相色譜法最重要的溶劑，它也是色谱最難純化和保持其特性的流動相之一。特別是高效在痕量分析檢測器處於高靈敏度狀態時，水的液相純度（理論上水電阻率約為18.2MΩ·cm）至關重要。長時間使用純度滿足不了要求的色谱水，有時會出鬼峰、高效怪峰。液相水的色谱純化可以采用蒸餾、離子交換、高效超純水製備係統等方法。液相水中有機物可以用高錳酸鉀或通過一根C₁₈柱去除。色谱電蒸餾水或去離子水必須至少在全玻璃係統下重蒸餾一次，高效過濾、液相脫氣後才能上機使用。色谱在使用電化學檢測器或其他高靈敏度檢測器時，二次蒸餾設備需要采用全石英玻璃係統。水中容易滋生微生物，一定要用新鮮的，最好每天換水，夏季更換時間最長也不要超過3d。

可以采用下列程序檢驗水的純度：首先泵100mL水通過C₁₈柱，然後跑一個線性梯度洗脫，流速為1mL／min，10min流動相甲醇從0升到100％，保持15min，通過在線紫外檢測器測定。要求在0.08AUFS擋位基線漂移小於10％，幾乎不出峰，即使出峰其峰高也小於滿刻度值的3％～5％。

2、乙腈：乙腈為反相高效液相色譜常用的溶劑，實驗室常用的隻能滿足紫外檢測器的需要。有時很難符合熒光檢測器和電化學檢測器的要求。

3、甲醇：甲醇是反相高效液相色譜常用的溶劑之一，其雜質主要是水。它的主要問題也是有些特性滿足不了熒光檢測分析和電化學檢測分析要求。

4、氯代烴類溶劑：在正相高效液相色譜中常用的二氯甲烷等氯代烴類溶劑中，添加穩定劑甲醇或乙醇。乙醇能夠提高流動相的極性，縮短正相高效液相色譜分析中各組分的保留時間。各批次之間濃度的變化也許會影響重複性。國內市場上可能不容易買到不含穩定劑的氯代烴類溶劑，但是可以用氧化鋁柱吸附的辦法或者用水提取脫掉。不含穩定劑的氯代烴類溶劑會緩慢分解，特別是與其他溶劑共存時。分解生成的鹽酸會腐蝕不鏽鋼部件。以戊烯為穩定劑的氯代烴類溶劑可避免產生上述問題。

5、醚類溶劑：這類溶劑中常添加穩定劑防止其氧化，如四氫呋喃中加有對苯二酚。這種穩定劑有紫外吸收，幹擾紫外檢測。可以在蒸餾中加入氫氧化鉀去除。另外，這類溶劑中的氧化物可用氧化鋁柱吸附淨化。

（二）固定相

固定相亦稱填料。液固吸附色譜法色譜柱中的填料就是以矽膠為主的吸附劑。液液分配色譜法色譜柱中的填料則是以超純矽膠或雜化顆粒等為載體，載體表麵上鍵合固定液。液相色譜固定相按化學組成分類可分為微粒矽膠、高分子微球、微粒多孔炭等主要類型；按結構和形狀分為薄殼型和全孔型，無定型和球型；按填料表麵改性與否可分為吸附型和化學鍵合型；也可以按洗脫模式分為吸附、液液分配、離子交換和凝膠滲透4類。在高效液相色譜填料的發展過程中曾使用過大顆粒全多孔矽膠，表麵多孔矽膠即薄殼型填料（φ30μm）、小顆粒全多孔矽膠（φ3～10μm）。現在廣泛采用的是人工合成的超純小顆粒全多孔矽膠和雜化顆粒矽膠材料。顆粒度變化趨勢見。

對載體的要求是孔容大（＞1mL／g），比表麵積大（＞200mz／g），孔徑為8～15nm。

一般認為，矽醇基官能團本身具有不同程度的酸性。微酸性的矽醇基團在分離中起重要作用，而矽氧烷鍵隻有很少影響或沒有影響。在相鄰矽原子上的酸性最強的羥基由於形成分子內氫鍵而常常引起如化學吸附、色譜峰拖尾的效應。為了減輕這一影響，通常采用化學鍵合固定相。雜化顆粒是在超純矽膠的基礎上，引入矽碳。它雖然解決了一些問題，但耐堿、耐高壓性能差。但在矽膠顆粒中引入亞乙基橋（bridgedethylenehybrid，BEH），較好地解決了上述問題，實現寬pH範圍下超高效快速分離。表麵帶電雜化顆粒（chargedsurfacehybrid，CSH）是指顆粒表麵帶有低水平的正電荷，可在低離子強度流動相條件下提高樣品載量和峰對稱性，同時仍維持亞乙基橋鍵顆粒技術固有的機械穩定性與化學穩定性。